مقایسه کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی موش بالغ پس از هم کشتی با سلول های سرتولی و سلول های رده ی فیبروبلاست موشی (sto)

هرچند اسپرماتوژنزیس برای باروری امری ضروری است، اطلاعات موجود درباره ی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی اندک است. این سلول ها ازطریق خودتکثیری و تمایز اسپرماتوزوا را به وجود می آورند و در طول زندگی فرد اسپرم زایی را فراهم می کنند. سلول های سرتولی در لوله های منی ساز در ارتباط نزدیک با سلول های ژرم هستند و یک محیط مطلوب را برای اسپرم زایی به وجود می آورند. هدف از انجام این مطالعه، بررسی اثر لایه های تغذیه کننده ی sto و سرتولی بر کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی در طول دو هفته کشت است. ابتدا سلول های سرتولی و سلول های بنیادی اسپرماتوگونی از بیضه ی موش بالغ با استفاده از دو مرحله ی هضم آنزیمی جدا شدند. ماهیت سلول ها ی سرتولی توسط ویمنتین و سلول های اسپرماتوگونی توسط نشان گرهای oct-4، cdh1، plzf و c-kit تایید شد. سلول های بنیادی اسپرماتوگونی روی لایه های تغذیه کننده ی سرتولی و sto به مدت دوهفته کشت داده شدند. تعداد و قطر کلونی ها توسط میکروسکوپ معکوس در طول دو هفته کشت اندازه گیری شد. همچنین بیان ژن های1 integrin و 6 integrinتوسط تکنیک های rt-pcr و real time pcr و ژن oct-4 توسط real time pcr ارزیابی شد. تحلیل آماری با استفاده از تحلیل واریانس با اندازه های تکراری، تحلیل واریانس یک طرفه، آزمون تعقیبی t زوجی و آزمون تعقیبی توکی انجام شد. نتایج نشان داد که در هر یک از گروه های هم کشتی با سلول سرتولی، هم کشتی با sto و کنترل، در متغیر های تعداد و قطر کلونی ها، بین چهار نقطه ی زمانی اختلاف معنی داری وجود داشت (0/05 <p)، اما تعداد و قطر کلونی ها در گروه هم کشتی با سلول سرتولی نسبت به دو گروه دیگر افزایش بیشتری داشت (0/05 <p). همچنین نتایج نشان داد که در هر یک از روز های مورد بررسی، بین سه گروه اختلاف معنی داری وجود داشت (0/05 <p) و تعداد و قطر کلونی ها در گروه سرتولی نسبت به دو گروه دیگر بیشتر بود (0/05 <p). نتایج به دست آمده rt-pcr نشان داد که بعد از دو هفته کشت، ژن 1 integrin در هر سه گروه بیان شد ولی ژن 6 integrin بیان نشد. همچنین بر اساس نتایج real time pcr، نیز سه ژن ذکر شده بیان شدند. بحث: با توجه به اثر بهینه ای که سلول های سرتولی بر سلول های بنیادی اسپرماتوگونی در هم کشتی با این سلول ها فراهم می کنند، که این موضوع توسط سایر مطالعات نیز تایید شده است، استفاده از سلول های سرتولی برای کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی پیشنهاد می شود.